广州病毒灭活效果检测标准

病毒是一种非细胞生命形态，它由一个核酸长链和蛋白质外壳构成，病毒没有自己的代谢机构，没有酶系统。因此病毒离开了宿主细胞，就成了没有任何生命活动、也不能立自我繁殖的化学物质。它的复制、转录、和转译的能力都是在宿主细胞中进行，当它进入宿主细胞后，它就可以利用细胞中的物质和能量完成生命活动，按照它自己的核酸所包含的遗传信息产生和它一样的新一代病毒。
病毒灭活的机理有三:
1、破坏包膜：
包膜含有脂类物质，因之有包膜的病毒可*被脂溶剂破坏，如、氯仿或去氧胆酸钠可使病毒灭活。实际上可利用病毒对脂溶剂的敏感性来检查病毒是否有包膜。物理因子，如渗透压改变、冻融、热和干燥等都可引起包膜破坏。一般认为，呼吸道感染的病毒对于燥抵抗力弱，传播主要是人间直接感染，这是因为有包膜的原故。
2、病毒蛋白质变性：
能使蛋白质变性的化学制剂都能使病毒灭活，如酚、次氯化物、酸和碱等。加热引起变性也是有效灭活的方法。一般说病毒对热抵抗力弱，60°C几分钟就使之感染性明显降低，因此在分离病毒时，从患者取来的标本需低温保存，*送往实验室，长期保存置于-80°C以下的低温条件。
3、病毒核酸的损害：
y线等电离可切断核酸，紫外线可使核苷酸链上相邻的嘧啶碱基形成二聚物，而破坏病毒基因的功能。另外吖啶橙或中性红等染料可与病毒核酸结合，暴露于光线之下，可使核酸分解，而使病莓灭活。

病毒灭活是指用物理或化学手段杀死病毒，但是不损害它们体内有用抗原的方法。灭活病毒，会使病容毒蛋白的结构受到破坏，蛋白不再有生理活性，所以失去感染，致病和繁殖能力，但是常规的灭活不影响病毒蛋白的一级结构，意思就是病毒蛋白的序列没有变化。*系统对抗原的识别分成两种，一种是构像表位，一种是线性表位。构象表位意思就是蛋白的三维结构，而线性表位就是蛋白的序列一级结构。T细胞只需要识别线性表位就成接受*呈递细胞给出的信号，引发*反应。所以灭活的病毒具有抗原性，但失去感染力。这个其实是很多疫苗的制造原理。灭活的病毒失去感染活性，但仍有融合活性。用于动物细胞工程中的细胞融合的诱导剂。

病毒培育与灭活实验：
1、实验材料：
实验用病毒株，宿主细胞，细胞培养瓶与 96 孔培养板，恒温水 浴箱，二氧化碳培养箱，层流**净工作台，-80℃低温箱，二氧化碳培养箱，液氮，离心设备，移液器，细胞维持培养基，细胞完全培养基，去离子水等。
2、实验过程：
病毒悬液制备：实验组，阳性对照组，阴性对照组。病毒培育需每日观察细胞与宿主细胞生长情况，接种细胞，病变收获病毒， 每组按照特定条件设置病毒灭杀实验验证，并每组进行噬斑病毒感染滴度测定。平均灭活对数值计算，评价。

病毒灭活效果测试：
主要适用于消毒产品鉴定或日常监测。用具有一定代表性的、活的病毒及其细胞感染技术，评价各种用途的消毒因子对测试病毒的杀灭效果。
试验器材：
(1)试验用病毒株:脊髓灰质炎病毒1型(poliovirus- I，PV-I )株;艾滋病病毒1型(HIV-1)美国株。
(2)宿主细胞:可采用VERO细胞系、BGM细胞、Hela细胞系或FL细胞系，作为PV-1的测试细胞。用含有人T淋巴细胞白血病病毒1型(human T cell leukemiavirus 1, HTLV-1) 基因的人淋巴细胞(株)作为HIV-1的测试细胞。
(3)细胞培养瓶与96孔培养板。
(4)恒温水浴箱等。
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