病毒杀灭效果试验,主要适用于消毒产品鉴定或日常监测。用具有一定代表性的、活的病毒及其细胞感染技术,评价各种用途的消毒因子对测试病毒的杀灭效果。按此方法进行的试验,只是对消毒因子的灭活病毒能力的重要方面进行验证。
病毒灭活试验病毒悬液的制备:
1、从液氮中取出冻存的试验用宿主细胞,在37°C温水中*融化,用毛细吸管移植于含有细胞维持液的细胞管内,吹吸数次,使混匀,立即离心(3000r/min, 3min) ,去上清液。再加入适当的细胞维持液,吹吸数次,使混匀,同上离心后,转种于加有10完全培养基的培养瓶中。逐日观察细胞生长情况,在细胞长满单层时,用于消毒试验。
2、取出低温冻存的试验病毒毒种,37°C水浴融化,用细胞维持液作10倍稀释,然后接种于已经长满单层细胞的细胞瓶内,置37°C温箱中,使与细胞吸附、生长。逐日观察病变,待3/4细胞出现病变时,收获病毒。
3、将含有病毒及宿主细胞的培养液,在冰浴条件下,用超声波(或反复冻融)破碎宿主细胞,释放病毒。然后,尽快离心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要为细胞碎片),上清液即为所需的病毒悬液。按每管1. 0分装于无菌离心管(1.5)中。
4、取1支病毒悬液,按病毒滴度测定法,测定其病毒滴度。其余均冷冻保存于-80°C备用。
病毒培育与灭活实验:
1、实验材料:
实验用病毒株,宿主细胞,细胞培养瓶与 96 孔培养板,恒温水 浴箱,二氧化碳培养箱,层流**净工作台,-80℃低温箱,二氧化碳培养箱,液氮,离心设备,移液器,细胞维持培养基,细胞完全培养基,去离子水等。
2、实验过程:
病毒悬液制备:实验组,阳性对照组,阴性对照组。病毒培育需每日观察细胞与宿主细胞生长情况,接种细胞,病变收获病毒, 每组按照特定条件设置病毒灭杀实验验证,并每组进行噬斑病毒感染滴度测定。平均灭活对数值计算,评价。
病毒灭活效果测试:
病毒消杀产品检测在对消毒产品开展病毒杀灭效果检测工作时,会根据产品实际情况进行病毒灭活分析,病毒灭活效果验证。
病毒灭活效果测试:
主要适用于消毒产品鉴定或日常监测。用具有一定代表性的、活的病毒及其细胞感染技术,评价各种用途的消毒因子对测试病毒的杀灭效果。
试验器材:
(1)试验用病毒株:脊髓灰质炎病毒1型(poliovirus- I,PV-I )株;艾滋病病毒1型(HIV-1)美国株。
(2)宿主细胞:可采用VERO细胞系、BGM细胞、Hela细胞系或FL细胞系,作为PV-1的测试细胞。用含有人T淋巴细胞白血病病毒1型(human T cell leukemiavirus 1, HTLV-1) 基因的人淋巴细胞(株)作为HIV-1的测试细胞。
(3)细胞培养瓶与96孔培养板。
(4)恒温水浴箱等。
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